真空冷冻干燥和保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

阑内皮细笾密度存活率结果真空冷冻千燥和深存的兔萄膜复水后萄睽内皮细，密度为邓士方+分，2，存活率78.57.结论真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持角膜内皮细胞的活性。
由于角膜移植材料来源短缺，供体与受体双方存在着人数时间及地点差异。因此，进步开发研究角膜移植材料长期有效的保存方法对角膜移植的开展具有重要意义。本研究采用真空冷冻干燥机真空冷冻干燥和保存兔角膜并对其内皮细胞活性进行了详细观察，结果如下。
1材料与方法i.i动物设备与药品1.1.1实览动物及分组人耳1兔，中国尻科大学附属第医院动物室提供。共计30只兔，深低温冷冻保存组20只眼，真空冷冻干燥保存组20只眼，正常对照组20只眼。
1.1.2实验设备真空冷冻干燥机，东北大学提供；简易梯度降温仪根据青岛医学院的设计制作1.1.3试剂甲基亚砜，20人白蛋白蔗糖。锥篮及茜素红。1640细胞培养基，兔血清。保护液的配制2步法甲基亚砜0河30浓度为510与20人白蛋白配制成2.51的保护液。
4柬41无，操作。
1.2角膜片制备遵守菌操作原则，沿角膜缘开球结胶，尖刀于角膜缘外3，处切开巩膜，然后以弯剪刀剪开巩膜全周，用小镊子将巩膜内面与其附着的虹膜及走状体轻轻撕去，整个过，保持前房形成，尽歉避免内皮皱糟或机械损伤，制作出个带2，3，巩膜环的角膜片。
深低温冷冻兔自膜的方法1 4条件下将角膜片依次放入1号液2号液中各平衡21.冷户衡。装角收片的冷冻瓶密封并放入降温仪内，以速率降温到30.，再以171的速率降至80，130将装角脱片的冷冻瓶液，1罐中保。
1.4真空冷冻千燥兔角脱的方法基，41件擂，也心，邶，碰麟厉冷冻瓶置干真空冷冻干燥室内。按照佳曲线及温度升高速率参数真空冷冻干燥角膜，待机内负压恒忘温度不变，瓶内充入，封盖保存。
1.5工艺曲线压办时间关系曲线温鹿时间关系曲线2.
分组细胞密度活性率正常兔深低温冷冻保存真空冷冻千燥保存1.6角膜内皮细胞活性检测检测前将真空冷冻干燥氮气封存的角膜片置于复水剂1640加兔血清中20爪。角膜内皮细胞活性检测采用锥，茜素红联合双染法染色2，对内皮细胞沾性率的计数常规方法计算出角膜内皮细胞活性率细胞密投。
2结果真空冷冻干燥和保存的角膜复水耵角膜内皮细胞密设及内皮细胞活件库1.角膜内皮细胞呈胞大小较均匀，边界清，连接紧密。各别细胞核染色x 3讨论角膜的真中冷冻干燥保存法是在冷冻保存法和脱水干燥保存法的基础上建立起来的。需经过系列的梯度冷冻及保护剂处理。从而获得干燥组织。而不损伤细胞的结构。复水6仍保持角膜组织的完整形态，正常功能。目前国内己有采用甘油保存的角膜行穿透忭角膜移植并获成功4.真中冷冻干燥保存角膜爷今国内外未报道。
汗燥蔗糖难于干燥。根据保护剂作机理5，我们选用甲基亚砜仍150为膜内保护剂，白蛋白作为膜外保护剂。干燥的目的是去除角膜细胞中的水分，真空冷冻干燥后，角膜比较容易实现无菌乜装便于长期保存。
角膜干燥过程中水分的排出比较复杂。为保证干燥过程中角膜细胞的活性，控制干燥过程的温度压力干燥速率是重要的大闪素。
角胶真空冷冻干燥后，在使用前需要进丁复水，角膜被真空冷冻干燥后，角膜组织结构及细胞形态虽然得以保留。何足水分疫失，备利，子及午多汽养成分随之失。真9冷冻干燥后的角膜的水决不1640加兔血清作为复水剂，复水时间2效果较好。
角膜内皮细胞的主要功能是调节角聪内的水分，维持角膜的透明性。真空冷冻千燥的角膜复水后肉眼及裂隙灯显微镜下角膜上皮及内皮完整光滑透明无脱落，整个角膜无水肿透明。显微镜下膜内皮细胞邑六边形，界限沾日析。深低温冷冻，造成角月，的内皮细胞损你，1.，脎17人为损伤主要现为细胞对机械性或渗透压性损伤的高度敏感。真空冷冻干燥会对角膜的内皮细胞产生更大密度及活性率低于深低温冷冻保存组，更低于正常兔，但是还是达到了较高的水平。真空冷冻干燥比深低温冷冻会对角膜的内皮细胞产生更大的损伤，但是，研究结果明真空冷冻干燥可以保持角膜内皮细胞的活性。随着真空冷冻干燥机的质量及性能存活率还会提高，从而创立种长期的角膜保存方法。
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初发01大鼠肾脏的主要病理改变为肾小球滤过率，高及肾脏肥人。其以同工酚的激活达变化与肾小球高滤过肾脏肥人同时出现，提同工酶在刑早期肾脏病变中发抨着屯要的调控作用。而，1各同工酶的细胞达变化不同也提它们爪的发生发展发挥不同作刖。