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电子显微镜检测法电子显微镜的放大倍率高,可以观察出细胞微小结构的改变,反应细胞的生命过程。电镜样品采用化学方法固定。透射电镜检测角膜纵剖面微观结构。利用戊二醛对冻干复水后的角膜进行前固定、锇酸进行后固定,将经冲洗、脱水、浸透、包埋、染色而制备的样品进行透射电镜(JDELJEM-1200EX)检测。细胞膜完整,细胞核膜完整,内皮细胞层与后弹力层连接紧密,可见细胞微观结构完好。扫描电镜检测角膜内皮表面的微观结构。
利用戊二醛对冻干复水后的角膜进行前固定、锇酸进行后固定,将经冲洗、脱水、置换、临界点干燥、导电性处理而制备的样品进行扫描电镜(JEDLJSM-T300)检测,冻干角膜的内皮细胞间连接紧密,内皮细胞轮廓接近于六边形,结构完好。
兔角膜移植实验评价角膜活性的*好办法是成功的移植实验,在手术显微镜(YZ20P5)下,用冻干的兔角膜,对10只家兔(10只眼)进行了自体角膜移植手术。术后7d内,10只角膜完全透明。后有5只眼因虹膜环形前粘连和新生血管出现的原因,植片浑浊,可能由于手术、术后护理、植片质量等多种原因造成的。另5只眼仍全层透明,虹膜前房清晰可见。这充分的证明了冻干角膜的活性。移植手术15d后的照片。冻干兔角膜的工艺可行,能冻干出适合贮藏、再植的活性角膜,按此工艺冻干3例人的角膜,完全成功。上述检测角膜活性的方法是可靠的,凡检测活性的眼角膜,再植手术均成功。冻干兔角膜再植手术的成功证明了通过真空冷冻干燥法可以实现角膜的保存。冻干法保存的角膜应用于临床,还需要医院及患者的大力支持。