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混合括养发酵王果龄的研究胡纯王国庐华侨大学化工学院，泉州3的011福建惠泉啤酒集团股份有限公司，惠安3的100酶。在此基础上，研究A23苗株和V81菌株混合培养方式对发酵L革果酸的影响。结果表明，A23菌株接入含有150g.L葡萄糖的混合发酵培养基中培养3d，后接入V81菌株并继续培养21，产酸水平*高，￡卑果酸浓度达78.，对投糖浓度的摩尔转化率达65.化。
王革果酸是生物体代谢过程中产生的种重要有机酸，它在食品工业、临床医熟化学工业和饲料工业等领域中都有十分重要的应用3.化十年来，人们已尝试过多种方法13进行1苹果酸生产的研巧。早期采用的直接提取法，系从天然动植物材料中提取1苹果酸，现意义不大化学合成法生产的苹果酸在应用上受到限制非糖质原料发酵法尚处于实验室水平酶转化法率先进入工业生产规模近几年在糖质原料发酵王艺中，步发酵法和混合发醇法都有较大进展，但有关的研究报道尚少。日本Takao等人W采用混合培养发酵L苹果酸，产物对投糖浓度的摩尔转化率为靳。；蒋明珠等人采用根霉和细菌泥合发酵1卑果酸，投糖浓度为120客。[1，产酸水平为520~54.88.1，换算为对投糖浓度的摩尔转化率为58.游~61.愚。本工作采用A23菌株和Y81菌株混合培养发酵I苹果酸。其投糖浓度可达150客1，1苹果酸产酸水平达73.3这1，对投糖浓度的摩尔转化率为65.腕。
、23和普通变形杆菌访615 1.1菌株无根根霉_ 1.2培养基1根霉斜面保藏培养基：马铃塞葡萄糖培养基。巧根霉种子培养基肖。[1：葡萄糖化0.01，玉米粉30，琼脂1.0，帕然。3根霉发酵培养基这。[：葡萄糖80，尿素醇15，a彷50a往和尿素分开进行灭菌，甲醇在接种前加入，pH值自然。4细茵斜面保藏培养基：牛肉膏蛋白腺培养基。句细菌种子培养基：见文献[1].6细菌发酵培养基6.[1：延胡索酸40，尿素1.，1吐3，1客3.7巧14，玉米浆。5，25.7吐0 0.0446证。6旺11，甲醇15，[3洗〔3和尿素分开灭菌，甲醇在接种前加入，90a往和尿素分开灭菌，甲醇在接种前加入，911自然。
1.3培养方法1根霉培养：根霉斜面菌种于马铃馨葡萄糖培养基上，在31条件下培养7.液体种子在30~32°3条件下于旋转式摇床上振荡培养化11.按1脱接种量将液体种子接入根霉发薛培养基，在3矿32°条件下，先于往复式摇床上培养1山后移至旋转式摇床上培养3止2细菌培养：细菌斜面菌种于30°仁培养34液体种子于3护32它旋转式摇床培养2 4按2胁接种量接于细茵发酵培养基中，培养243混合培养：按1胁接种量将根霉液体种子接入混合发酵培养基中，先在往复式摇床上培养1山再在旋转式摇床上培养2山后按2脱接种量接入细菌液体种子，继续培养21.培养温度为30~32：。
W上根霉细茵的液体种子培养发酵及混合发酵，均在2洗L的H角瓶装量为25 1.4分析方法延胡索酸的定量测定，采用高铺酸滴定法；王卑果酸的定量测定，采用2，7姜二酪法〔ll〕此外巧酸度计测定pH巧售丽法W现旋糖等。2结果与讨论王1 ~23菌株发醉试验根霉产延胡索酸能力和细菌延胡索酸酶活性，它是影响混合培养发酵苹果酸的关键因素。为了提高23菌株延胡索酸发酵水平，试验中尝试将根霉发酵培养基中的葡萄糖浓度0由80g.L提高到l20g.L或l50g.L，分别考察A2靖株对它们的转化情况，结果见表l.由表可见：lA23茵表1 23菌株发酵试验结果株对不同浓度的葡萄糖转化都较彻。：/31知，告。1如4/居。11如倍础，/怖，当葡萄糖浓度为1洗。[1时，发酵液中的延胡索酸浓度〔口达78_9 3.[1，对耗糖的摩尔转化率如为沿；323茵株除产延胡索酸外，尚可产定浓度：。的1苹果酸。
2.2心81菌株发醉试验在混合发酵中，利用V~81菌株的延胡索酸酶活性tW，将A23菌株发醇葡萄糖生成的延19914hinaAadeiJoual胡索酸转化为主苹果酸。试验中将细菌发酵培养基中的延胡索酸浓度仇调为40旨。1；，60这。[相8这。探讨￥~81菌株对不同浓度碳源的发酵情况，结果如表2所示。从表可见，当延胡索酸浓度为80g.L，V81菌株仍有很强的转化能力，左革果酸浓度。、lA可达72.[，对投入延胡索酸的质量转化率说胜90.愚。
2.3混合培养发龄1果酸23.1混合培养方式对发左羊果酸的影响混合发酵工艺实质是将根霉的延胡索酸发醇和细菌的苹果酸转换发酵两个过程墩合在起，即根霉的发酵产物作为细菌的发酵底物。为探讨二者接入混合发醇培养基中的适宜时间，试验中分别考察了fA=0dA23菌株和V81菌株同时接种，fA二ldA23菌株接种ll后接入V81菌株，fA=2dA23菌株接种2d后接入V~81菌株和fA=3dA23菌株接种3d后接入V81菌株等不同情况对合发酵周期为5成苹果酸的影响，结果见表3.由表可知，二者同时接种，左啤果酸产酸水平低，发醇液中有较多的延胡索酸。当人23菌株先接种残余的延胡索酸很少。此外，上各种合培养方式，发醇5击培养基中葡萄糖均被耗尽残糖浓度剪。=0.
23.2混合培养发主羊果酸进程试验中控制=3山发酵周期为53，进行瓶合培养发酵/果酸，定期测定发醇液中果酸LA浓度，延胡索酸FU膊度和残糖1浓度，结果如图1所示。图1表明，发酵34延胡索酸积累到*篼水平，达68.6.11，此时糖耗尽。接入￥1菌株后，延胡索酸快速1后接入~1菌株，发酵库果酸理想转化为1苹果酸至第5加寸，延胡索酸基本耗尽；库果酸的*终浓度可达73.
其对投糖浓度的摩尔转化率为始燃。
3结束语本研巧采用A23菌株和V81菌株混合培养发酵L果酸，投糖浓度达パ0g.L，柄霉先接人发鹏瓣巾31，滕人细这续嫌21，沛，作赚*可73.34去1投糖浓币湛尔转巧输1邮。化。班化、又胡纯王苹果酸产生苗黄曲霉巧《巧机《//口8发酵特性的研究[化食品与发酵工业，1999，25胡纯。固定化黄曲霉生产1果酸的研究[1].华侨大学学报自然科学版，19典，203：240~245金其荣。￡苹果酸产生菌的选育[化无锡轻工学院学报，1981创刊号：89~97 4巧胡纯。细胞转化法生产王苹果酸的研充[化华侨大学学报巧然科学版，1典9，204：349北京大学生物系生物化学教研室编。生物化学实验指导。北京：高等教育出版社，巧85.30~31
